實驗室如何滅菌?

消毒和滅菌是微生物實驗技術(shù)中最基本的操作技術(shù)，因此從事藥品生產(chǎn)、檢驗的人員均應(yīng)了解消毒和滅菌的基本概念、兩者的關(guān)系，各自的應(yīng)用方法及其意義，操作時應(yīng)嚴格執(zhí)行相關(guān)的操作規(guī)程，一方面確保生產(chǎn)與檢驗工作的效果，另一方面也是對自身安全的保護。

消毒和滅菌的概念：

1、消毒：指對病原微生物的繁殖體的致死作用，但不能殺死芽孢等全部微生物，因此消毒是不干凈的，不能代替滅菌。凡用于消毒的化學藥品稱為消毒劑，因此人們也常稱消毒劑為化學消毒劑。

2、滅菌：殺滅物體中所有活的微生物（含芽孢）的作用，滅菌是采用強烈的理化因素使任何物體內(nèi)外部的一切微生物永遠喪失其生長繁殖能力的措施。通常用物理方法來達到滅菌的目的。

消毒和滅菌的關(guān)系

1、共性：殺滅微生物以控制其污染和防止傳播。

2、區(qū)別：

消毒滅菌方法

目前常用的消毒滅菌方法多采用物理方法(如干熱滅菌法、濕熱滅菌法、過濾除菌法、射線殺菌法等)和化學方法(消毒劑、抗生素)兩大類。

1.干熱滅菌法

干熱滅菌法是利用恒溫干燥箱內(nèi)120oC-150oC的高熱，并保持90-120分鐘，殺死細菌和芽孢，達到滅菌目的的一種方法。主要適用于不便在壓力蒸汽滅菌器中進行滅菌，且不易被高溫損壞的玻璃器皿、金屬器械以及不能和蒸汽接觸的物品的滅菌。用此方法滅菌的物品干燥，易于貯存。酒精燈火焰燒灼滅菌法也是屬于干熱滅菌的方法之一。在進行動物細胞體外培養(yǎng)工作時，常須利用工作臺面上的酒精燈火焰對金屬器具及玻璃器皿口緣進行補充滅菌。

2.濕熱滅菌法

壓力蒸汽濕熱滅菌法，它利用高壓蒸汽以及在蒸汽環(huán)境中存在的潛熱作用和良好的穿透力，使菌體蛋白質(zhì)凝固變性而使微生物死亡。高壓蒸汽滅菌器的蒸汽壓力一般調(diào)整為1.0～1.1kg/cm2，維持20～30min即可達到滅菌效果。

3.射線滅菌法

利用紫外線燈進行照射滅菌的方法。紫外線是一種低能量的電磁輻射，可以殺滅多種微生物。紫外線的作用機制是通過對微生物的核酸及蛋白質(zhì)等的破壞作用而使其滅活。適合于實驗室空氣、地面、操作臺面滅菌。滅菌時間為30min。用紫外線殺菌時應(yīng)注意，不能邊照射邊進行實驗操作，因為紫外線不僅對人體皮膚有傷害，而且對培養(yǎng)物及一些試劑等也會產(chǎn)生不良影響。

4.過濾除菌法

過濾除菌法是將液體或氣體通過有微孔的濾膜過濾，使大于濾膜孔徑的細菌等微生物顆粒阻留，從而達到除菌的方法。過濾除菌法大多用于遇熱易發(fā)生分解、變性而失效的試劑、酶液、血清、培養(yǎng)液等。目前，常用微孔濾膜金屬濾器或塑料濾器正壓過濾除菌，或用玻璃細菌濾器、濾球負壓過濾除菌。濾膜孔徑應(yīng)在0.22～0.45μm范圍內(nèi)或用更小的細菌濾膜，溶液通過濾膜后，細菌和孢子等因大于濾膜孔徑而被阻，并利用濾膜的吸附作用，阻制小于濾膜孔徑的細菌透過。

5.化學消毒劑消毒法

化學消毒劑消毒法用于那些不能利用物理方法進行滅菌的物品、空氣、工作面、操作者皮膚、某些實驗器皿等。

6.抗生素抑菌法

抗生素抑菌法主要用于培養(yǎng)液，是培養(yǎng)過程中預(yù)防微生物污染的重要手段以及作為微生物污染不嚴重時的“急救"措施。常用的抗生素有青霉素、鏈霉素和新霉素等。

不同種類物品及培養(yǎng)物

消毒滅菌方法

1.無菌操作室滅菌

培養(yǎng)材料進行培養(yǎng)、觀察或更換培養(yǎng)液時，必須從各方面防止任何污染物進入培養(yǎng)液或容器，所以無菌操作室的滅菌是至關(guān)重要的。由于無菌操作室的污染來源主要是空氣中的細菌和真菌孢子，因此長期停用后的無菌操作室應(yīng)進行熏蒸滅菌。熏蒸是用高錳酸鉀+甲醛[(2ml甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]進行無菌室的滅菌。經(jīng)常使用的無菌操作室，在每次使用前都應(yīng)進行地面衛(wèi)生清潔，并用紫外線燈照射30 min，進行空氣滅菌。對超凈工作臺，每次操作前用紫外燈照射30min，然后用70%～75%酒精擦拭。

2.培養(yǎng)液滅菌

培養(yǎng)液在制備過程中帶有各種雜菌，分裝后應(yīng)立即滅菌，或在24小時內(nèi)完成滅菌工序。目前常用過濾除菌法除去培養(yǎng)物操作液和培養(yǎng)液中的細菌?；?qū)ε囵B(yǎng)液中耐熱組分先進行高壓蒸汽滅菌，然后在無菌室加入經(jīng)過過濾除菌的不耐熱溶液，混勻后分裝備用。使用高壓蒸汽滅菌器滅菌時，將分裝好的培養(yǎng)液放入底部有一定量(淹沒加熱管)涼水的高壓蒸汽滅菌器內(nèi)，增壓至0.35-0.4kg/cm2時排凈滅菌器內(nèi)冷空氣，以便使蒸汽能到達各個消毒部位，保證消毒滅菌干凈。然后繼續(xù)加壓加熱，當壓力表讀數(shù)達到1.0-1.1kg/cm2為121oC，保持15-20 min即可。由于消毒滅菌效果取決于溫度而不是壓力，所以在一定壓力下保持較長的消毒滅菌時間是必須的。

3.培養(yǎng)材料的消毒滅菌

采自動物機體的實驗材料，攜帶著微生物及雜質(zhì)，接種前須進行表面消毒滅菌，對內(nèi)部已受微生物侵染的材料應(yīng)予以淘汰。從動物機體采集的某些組織塊，須用消毒劑進行浸泡處理，進行表面消毒。常用消毒劑有過氧化氫(10-12%，浸泡5-15min)、過氧乙酸(0.05%，浸泡30 s-1min)、酒精(70-75%，浸泡2min)。